交换系列集共70部

<p id="hc5il"></p>
    <pre id="hc5il"></pre>
    <td id="hc5il"></td>
  • <track id="hc5il"><strike id="hc5il"><tt id="hc5il"></tt></strike></track>
  • <table id="hc5il"><ruby id="hc5il"></ruby></table>
  • 分光光度計簡介

    概述

    分光光度計是在生物學,化學,臨床和環境研究中廣泛使用的儀器。

    分光光度法是通過使用分光光度計使光束穿過樣品的化學物質吸收量的定量測量。

    通過測量檢測到的光強度,該方法可用于確定樣品中溶質的濃度。

    分光光度法的概念

    朝樣品輻射的光束由光子流組成。

    當光子遇到樣品中的分子時,這些分子可能會吸收其中的一些分子,從而減少光束中光子的數量并降低檢測到的信號的強度。

    透射率是通過樣品的光的比例,定義為通過樣品的光的強度相對于入射光的強度。吸光度是透射率的倒數,是分光光度計要測量的數量。

    根據吸光度,可以根據比爾-朗伯定律確定樣品溶液的濃度,該定律指出,吸光度與樣品濃度之間存在線性關系。根據比爾-蘭伯特定律,吸光度是消光系數的乘積,消光系數是溶質吸收給定波長的光的強度,光穿過樣品的長度或光程長度以及溶質濃度的量度。通常,進行吸光度測量的目的是測量樣品的濃度。

    分光光度計的組件

    每個分光光度計都包括一個光源,一個準直儀(一個透鏡或聚焦裝置,可發射強烈的直光束),一個單色儀(用于將光束分成其組分波長)以及一個波長選擇器(或狹縫),用于選擇所需的波長。該視頻中討論的分光光度計中使用的光的波長在紫外線和可見光范圍內。分光光度計還包括某種樣品架,一個光電檢測器(用于檢測被吸收的光子數量)以及一個用于顯示檢測器輸出的屏幕。

    較新的分光光度計直接連接到計算機,可以控制實驗參數并顯示結果。

    操作分光光度計

    在進行分光光度法時,根據所使用的生物或化學溶液的類型,請務必采取適當的預防措施,例如戴上手套。

    在測量樣品的紫外線可見光譜之前,請打開機器,讓燈和電子設備預熱。

    用相同的pH值和類似的離子強度制備空白溶液,但不加分析物的空白溶液;必要的步驟,因為電池和溶劑會散射一些光。

    傳統的分光光度計樣品架設計用于容納塑料和石英比色皿。繼續將空白溶液移入比色杯中。

    擦去所有指紋并從比色皿的外部濺出后,將比色皿正確插入樣品架并關閉比色皿室的門。

    切勿忘記關上門,因為打開的分光光度計發出的紫外線會損壞眼睛和皮膚。

    設置要在樣品上透射的所需波長或波長范圍,這取決于分析物吸收的**佳光波長。然后,通過讀取空白值將儀器歸零,這將從樣本緩沖區中減去背景。

    根據要執行的分光光度實驗的類型,可能有必要在樣品測量之前生成標準曲線,從而**終確定樣品分析物的濃度。

    讓樣品達到合適的溫度并輕輕混合,以免氣泡進入??梢詫悠分苯犹砑拥絻x器內的比色杯中,并讀取讀數。

    對樣品進行吸光度測量后,進行適合實驗的計算;例如確定濃度或酶活性速率。

    應用

    許多生物研究實驗室每天都使用分光光度計。

    分光光度計的一種常見應用是細胞密度的測量。細胞密度測量可用于生成細菌的對數生長曲線,從中可以確定誘導重組蛋白的**佳時間。

    分光光度計還可用于測量化學反應速率。在該示例中,吸光度用于通過隨時間在452 nm處反應中間體的消失來監測酶促反應??梢酝ㄟ^將數據擬合為適當的公式來計算該酶促步驟的速率。

    **近,微體積分光光度計的推出消除了樣品架的必要性。這種分光光度計利用表面張力來固定樣品。

    微體積光譜儀**適合用于測量有限體積的昂貴樣品的質量和濃度,例如生物分子,包括蛋白質和核酸。

    蛋白質在280 nm處的吸光度取決于色氨酸,酪氨酸和苯丙氨酸中芳族側鏈的含量,以及半胱氨酸-半胱氨酸二硫鍵的存在。

    可以從其在280 nm處的吸光度和消光系數(基于氨基酸組成)確定蛋白質濃度。

    DNA和RNA在260 nm處都有一個**大吸光度,可以確定它們的濃度。核酸的純度也可以根據特定波長下吸光度讀數的比率進行評估。

    相關閱讀

    交换系列集共70部
    <p id="hc5il"></p>
    <pre id="hc5il"></pre>
    <td id="hc5il"></td>
  • <track id="hc5il"><strike id="hc5il"><tt id="hc5il"></tt></strike></track>
  • <table id="hc5il"><ruby id="hc5il"></ruby></table>